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生物缓冲剂的分类和应用——威德利试剂公司帮您解读

发布时间:2021-07-04   点击次数:178次

一生物缓冲剂的分类:

1.    磷酸盐缓冲液

  磷酸盐缓冲液是应用广泛的生物缓冲液。由于其二次离解作用,缓冲液pH值范围较宽,可配置不同pH值的酸性、碱性和中性缓冲液:

       制备酸性缓冲液可直接使用NaH2PO4或KH2PO4, pH值范围为1~5;

 

  碱性缓冲液可直接使用Na2HPO4或K2HPO4, pH范围为9~12;

 

  中性缓冲液中含有等量的NaH2PO4和Na2HPO4或等量的KH2PO4和K2HPO4溶液,pH值为5.5~8.5。

     优点:①易于配制成各种浓度 ;②pH值范围宽;③pH受温度的影响小;

   缺点:①易与常见的钙、镁、重金属离子形成沉淀;②抑制某些生化过程;

 

2. Tris缓冲液

 

  Tris缓冲液在生物化学研究中有着广泛的应用。它是弱碱,通常在“中性”范围内使用。Tris-HCl缓冲:pH = 7.5 ~ 8.5;三磷酸缓冲液:pH = 5.0 ~ 9.0。

 

  除TRIS - hcl外,TRIS还有多种衍生化缓冲:

 

  TBS=Tris-HCl+ NaCl+KCl,常用来清洗免疫染色组织或Western blotting中的Western blotting膜;

 

  TBST=Tris-HCl+NaCl+tween20,一种常用于Western Blotting的膜缓冲液;

 

  TE=Tris-HCl+EDTA,对DNA碱基具有保护作用,常用于DNA的稳定和储存;

 

  TAE=Tris碱+乙酸+EDTA,是一种广泛应用于短片段DNA电泳的缓冲体系;

 

  TBE=三碱基+硼酸+EDTA,适用于长期DNA电泳,对小片段有较好的分离效果。

 

  优点: ①因为Tris碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;②对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。

  缺点:①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.1;②温度效应大,温度变化对缓冲液pH值的影响很大,所以一定要在使用温度下进行配制,室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃~4℃。 ③易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封。④此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。

 

3. Good’s缓冲液

 

  在 1960 年代中期,N.E.Good鉴于一般的缓冲液系统并不适合生化实验所使用,必须用人为设计和人工合成的方法来找到专门用于生命科学研究的特定的缓冲体系,这些缓冲体系们都具有以下特质:

 

  1.pKa 在6~8 之间;2.在水溶液中有高溶解度;3.盐效应很小;4.不易被运送通过细胞膜;5.不易受温度、离子组成、浓度等因素影响解离度;6.不会与金属离子形成错合物,或错合物不沉淀、不干扰生物活性;7.化学性质稳定。

 

  Good’s缓冲液的主要优点是不参加和不干扰生物化学反应过程,对酶化学反应等无抑制作用,所以它们专门用于细胞器和极易变性的、对pH敏感的蛋白质和酶的研究工作。

 

  其缺点是:①价格昂贵,②对测定蛋白质含量的双缩脲法和Lowry法不适用,因为它们会使空白管的颜色加深。

二几种生物缓冲剂的应用:

 

 

1、Tris乙磺酸(TES)

应用描述∶ pKa7.4(生理pH),是一种应用非常广泛的生物缓冲试剂。TES适用于各种需要二价金属离子的细胞培养体系,然而许多其他缓冲液(比如柠檬酸盐或者磷酸盐)会产生螯合或者沉淀反应,使其不能满足这种要求。

Bis-Tris,中文名双(2-羟已基)氨基(三羟甲基)甲烷,CAS NO.6976-37-0,—种惰性的两性离子缓冲液,随着温度的变化其解离常数只发生细微的变化。适用于血红蛋白的分离,冻干保存中可保护血红蛋白的稳定性。可用作肌酶活性分析的有效缓冲液。2-D凝胶电泳等电点聚焦电泳(IEF )中用作阴极液。

2、Tricine

应用描述∶ 应用ZUI广泛的缓冲剂之一,常用做电泳缓冲液,以及用来重悬细胞沉淀。Tricine具有低负电荷和高离子强度的特性,非常适用于电泳分离1~100 kDa的低分子量蛋白。用来分离低分子量多肽的缓冲液组分之一,一种有效的羟自由基清除剂。

3、PIPES、POPSO

PIPES,pKa接近生理pH,适用于细胞培养作业。植物和动物组织研究中使用戊二醛法组织学用缓冲液,可降低脂质损失。POPSO:用于储存DNA样品,在amoniallyl标记过程可避免与首胺基团的交叉反应。

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